Bertujuan untuk mempelajari Prinsip Kerja dan Pengoperasian Peralatan yang digunakan di Laboratorium Mikrobiologi. Laboratorium mikrobiologi modern harus dilengkapi dengan peralatan berikut.
Alat-alat Laboratorium Mikrobiologi :
1. Oven Udara Panas untuk Sterilisasi
Peralatan gelas disterilkan pada suhu 180 ° C selama 3 jam. Oven memiliki pengatur pengatur suhu, yang dengannya suhu konstan yang diperlukan dapat diperoleh dengan cara coba-coba. Pembacaan dial termostat adalah perkiraan dan suhu yang tepat dibaca dengan memasukkan termometer ke dalam oven atau pada termometer berbentuk L.
Dalam oven modern (Gambar 3.3), terdapat tampilan suhu digital dan pengatur suhu otomatis untuk mengatur suhu yang diinginkan dengan mudah. Waktu diatur oleh timer digital. Setelah gelas diisi, pintu ditutup dan oven dihidupkan.
2. Oven Pengeringan
Untuk persiapan reagen tertentu, gelas, setelah dibersihkan dan dibilas dengan air suling, harus dikeringkan. Mereka dikeringkan di dalam oven pengering pada suhu 100 ° C sampai peralatan gelas benar-benar kering.
3. Autoclave
Autoclave adalah inti dari laboratorium mikrobiologi. Ini digunakan tidak hanya untuk mensterilkan zat cair seperti media yang sudah disiapkan dan larutan garam (pengencer), tetapi juga untuk mensterilkan peralatan gelas, bila diperlukan.
Ini memiliki prinsip kerja yang sama dengan panci tekan rumah tangga. Suhu maksimum yang bisa didapat dengan merebus air dalam wadah terbuka adalah 100 ° C (titik didih air).
Suhu ini cukup untuk membunuh hanya pembentuk non-spora, tetapi sulit untuk membunuh bakteri pembentuk spora pada suhu ini, karena mereka melarikan diri dengan membentuk spora tahan panas. Dibutuhkan waktu yang sangat lama untuk membunuh spora pada suhu ini.
Sebaliknya, ketika air direbus dalam wadah tertutup, karena tekanan yang meningkat di dalamnya, titik didih meningkat dan suhu uap jauh melebihi 100 ° C. Suhu tinggi ini diperlukan untuk membunuh semua bakteri termasuk pembentuk spora yang tahan panas. Temperatur steam meningkat dengan meningkatnya tekanan steam
Dalam mengoperasikan autoklaf vertikal standar, air yang cukup dituangkan ke dalamnya. Jika air terlalu sedikit, bagian bawah autoclave akan mengering selama pemanasan dan pemanasan lebih lanjut akan merusaknya.
Jika memiliki elemen pemanas air built-in, (Gambar 3.5) ketinggian air harus dijaga di atas elemen. Sebaliknya, jika air terlalu banyak, dibutuhkan waktu lama untuk mencapai suhu yang dibutuhkan.
Bahan yang akan disterilkan ditutup dengan kertas kerajinan dan disusun pada bingkai aluminium atau kayu yang disimpan di bagian bawah autoclave, jika tidak jika bahan tetap setengah terendam atau mengambang, bahan tersebut akan jatuh saat mendidih dan air dapat masuk. Autoklaf ditutup dengan sempurna kedap udara hanya menjaga katup pelepas uap tetap terbuka.
Kemudian, dipanaskan di atas api atau dengan elemen pemanas built-in. Udara di dalam autoklaf harus dibiarkan keluar sepenuhnya melalui katup ini. Ketika uap air terlihat keluar melalui katup, itu ditutup.
Suhu dan tekanan di dalam terus meningkat. Peningkatan tekanan diamati pada tombol tekan. Biasanya sterilisasi dilakukan pada 121 ° C (tekanan 15 pon per inci persegi yaitu 15 psi) selama 15 menit. Waktu yang diperlukan dipertimbangkan dari titik, ketika tekanan suhu yang dibutuhkan tercapai.
Setelah tekanan suhu yang dibutuhkan tercapai, itu dipertahankan dengan mengontrol sumber pemanas. Setelah waktu yang ditentukan (15 menit), pemanasan dihentikan dan katup pelepas uap sedikit terbuka. Jika segera dibuka sepenuhnya, karena penurunan tekanan yang tiba-tiba, cairan dapat keluar dari wadah.
Secara bertahap, pelepasan uap dibuka lebih banyak, sehingga memungkinkan semua uap keluar. Autoklaf dibuka hanya setelah tekanan turun kembali ke tekanan atmosfer normal (0 psi). Autoclave tidak boleh dibuka, jika masih ada tekanan di dalamnya. Bahan panas yang disterilkan dihilangkan dengan memegangnya menggunakan kain bersih atau sarung tangan berlapis asbes.
Dalam kasus autoclave horizontal berjaket uap, boiler menghasilkan uap (Gambar 3.6). Itu dilepaskan pada tekanan yang ditentukan, ke ruang luar (jaket). Udara dibiarkan keluar dan kemudian katup pelepas uapnya ditutup.
Jaket panas memanaskan ruang dalam, dengan demikian memanaskan bahan yang akan disterilkan. Ini mencegah kondensasi uap pada material. Sekarang, uap di bawah tekanan dilepaskan dari jaket ke ruang dalam dan udara dibiarkan keluar darinya.
Kemudian, katup pelepas uapnya ditutup. Uap di bawah tekanan di ruang dalam mencapai suhu lebih dari 100 ° C, yang dapat mensterilkan bahan yang disimpan di dalamnya. Autoclave juga memiliki sistem penutup otomatis, yaitu kecuali suhu dan tekanan turun mendekati kondisi ruangan, pintu tidak dapat dibuka.
Selain tombol tekanan, ini juga memiliki tombol suhu terpisah untuk menunjukkan suhu di dalam ruang dalam. Selain itu, autoclave mempertahankan suhu dan tekanan secara otomatis dan mati setelah waktu sterilisasi yang ditentukan.
4. Inkubator Mikrobiologi
Pertumbuhan mikroba yang besar diperoleh di laboratorium dengan menumbuhkannya pada suhu yang sesuai. Ini dilakukan dengan menginokulasi mikroba yang diinginkan ke dalam media kultur yang sesuai dan kemudian diinkubasi pada suhu optimal untuk pertumbuhannya.
Inkubasi dilakukan dalam inkubator (Gambar 3.7), yang mempertahankan suhu konstan yang sesuai untuk pertumbuhan mikroba tertentu. Karena sebagian besar mikroba patogen bagi manusia tumbuh subur pada suhu tubuh manusia normal (yaitu 37 ° C), suhu inkubasi yang biasa adalah 37 ° C.
Inkubator memiliki termostat, yang mempertahankan suhu konstan, diatur sesuai kebutuhan. Pembacaan suhu di termostat adalah perkiraan. Temperatur yang akurat dapat dilihat pada termometer yang terpasang pada inkubator. Suhu yang tepat, sesuai kebutuhan, diatur dengan memutar kenop termostat dengan cara coba-coba dan mencatat suhu pada termometer.
Sebagian besar inkubator modern (Gambar 3.8) dapat diprogram, yang tidak memerlukan pengaturan suhu trial and error. Di sini, operator mengatur suhu yang diinginkan dan periode waktu yang diperlukan.
Inkubator secara otomatis mempertahankannya. Kelembaban dipasok dengan menempatkan gelas kimia air di inkubator selama periode pertumbuhan. Lingkungan yang lembab memperlambat dehidrasi media dan dengan demikian, menghindari hasil eksperimen palsu.
5. Inkubator BOD (Inkubator Suhu Rendah)
Beberapa mikroba ditanam pada suhu yang lebih rendah untuk tujuan tertentu. Inkubator suhu rendah BOD (Gambar 3.9), yang dapat mempertahankan suhu dari 50 ° C hingga serendah 2-3 ° C digunakan untuk inkubasi dalam kasus seperti itu.
Suhu konstan yang diinginkan diatur dengan memutar kenop termostat. Rotasi kenop termostat menggerakkan jarum pada dial yang menunjukkan suhu perkiraan. Suhu yang dibutuhkan secara tepat diperoleh, dengan memutar kenop secara halus dengan cara coba-coba dan mencatat suhu pada termometer yang dipasang pada inkubator.
Sebagian besar inkubator BOD modern (Gambar 3.10) dapat diprogram, yang tidak memerlukan pengaturan suhu trial and error. Di sini, operator mengatur suhu yang diinginkan dan periode waktu yang diperlukan. Inkubator secara otomatis mempertahankannya.
6. Kulkas (Kulkas)
Ini berfungsi sebagai gudang untuk bahan kimia termo labil, larutan, antibiotik, serum dan reagen biokimia pada suhu yang lebih dingin dan bahkan pada suhu di bawah nol (pada kurang dari 0 ° C). Kultur stok bakteri juga disimpan di dalamnya antara periode sub-kultur. Ini juga digunakan untuk penyimpanan media yang disterilkan, untuk mencegah dehidrasinya.
7. Lemari es dalam
Ini digunakan untuk menyimpan bahan kimia dan mengawetkan sampel pada suhu di bawah nol yang sangat rendah.
8. Saldo Top-pan Elektronik
Ini digunakan untuk menimbang media dan bahan kimia lainnya dalam jumlah besar, di mana penimbangan yang tepat tidak terlalu penting.
9. Neraca Analitik Elektronik
Ini digunakan untuk menimbang sejumlah kecil bahan kimia dan sampel secara tepat dan cepat.
10. Keseimbangan Analitik Pan Ganda
Ini digunakan untuk menimbang bahan kimia dan sampel dengan tepat. Penimbangan membutuhkan lebih banyak waktu, yang hanya digunakan dalam keadaan darurat.
11. Pabrik Air Suling
Air digunakan dalam persiapan media dan reagen. Jika media dibuat dengan menggunakan air ledeng, kotoran kimiawi yang ada di dalamnya dapat mengganggu pertumbuhan mikroorganisme di dalam media. Selain itu, semakin tinggi kandungan bakteri dalam media, semakin lama waktu yang dibutuhkan untuk sterilisasi dan semakin besar peluang bertahan hidup beberapa bakteri.
Air suling, meskipun tidak bebas bakteri, mengandung lebih sedikit jumlah bakteri. Itulah mengapa; itu lebih disukai dalam persiapan media mikrobiologi. Ini juga digunakan dalam pembuatan reagen, karena kotoran kimiawi yang ada dalam air keran dapat mengganggu berfungsinya bahan kimia reagen.
Karena pembuatan air suling dengan kondensor Liebig merupakan proses yang memakan waktu, di sebagian besar laboratorium, ini disiapkan oleh 'pabrik air suling'. Biasanya pabrik air suling terbuat dari baja atau kuningan. Ini juga disebut air suling.
Ini memiliki satu saluran masuk untuk dihubungkan ke keran air dan dua saluran keluar, satu untuk air suling untuk dimasukkan ke dalam wadah dan yang lainnya untuk aliran keluar dari air pendingin panas ke bak cuci. Masih dipasang di dinding. Itu dipanaskan oleh elemen pemanas listrik built-in (pemanas imersi).
Still bekerja dengan efisien, ketika air yang masuk diatur sedemikian rupa sehingga suhu air pendingin yang mengalir keluar dari masih ke bak cuci tidak terlalu tinggi atau terlalu rendah, yaitu air hangat harus mengalir keluar. Air suling mungkin mengandung jejak logam yang terkorosi dari wadah baja atau kuningan.
Untuk mendapatkan air suling bebas logam, alat destilasi kaca digunakan dan masih lebih baik lagi adalah alat destilasi kuarsa. Namun, untuk laboratorium mikrobiologi, peralatan distilasi baja atau kaca sudah cukup. Untuk analisis presisi, air suling ganda atau tiga kali digunakan.
12. Sistem Pemurnian Air Ultra Murni
Untuk pekerjaan analitik presisi, sekarang-a-hari, alih-alih menggunakan air suling ganda atau tiga kali, air saringan mikro digunakan. Dalam kasus air suling, ada kemungkinan bahwa, beberapa zat volatil yang ada di dalam air menguap selama pemanasan air dan kemudian terkondensasi ke dalam air suling yang dikumpulkan.
Jadi, mungkin ada jejak zat semacam itu di air suling. Untuk mengatasinya, digunakan air ultra murni. Di sini, air dibiarkan melewati pori-pori mikroskopis yang sangat halus, yang menahan partikel tersuspensi mikroskopis termasuk mikroba.
Kemudian, air melewati dua kolom resin penukar ion. Resin penukar anion mengadsorbsi caption yang ada dalam air, sedangkan resin penukar caption mengadsorpsi anion. Air yang keluar sangatlah murni.
13. Homogeniser
Untuk analisis mikrobiologi, sampel cair langsung digunakan, sedangkan sampel padat harus dicampur secara menyeluruh dengan pengencer (biasanya garam fisiologis), sehingga diperoleh suspensi bakteri yang homogen. Suspensi ini diasumsikan mengandung bakteri secara homogen.
Pencampuran sampel padat dan pengencer dilakukan dengan homogenizer, di mana motor memutar impeler dengan bilah tajam dengan kecepatan tinggi di dalam cangkir homogenizer tertutup yang berisi sampel dan pengencer. Ini memiliki pengatur kecepatan untuk mengontrol kecepatan putaran impeller.
Di beberapa laboratorium pencampuran dilakukan secara manual dengan alu dan lesung yang disterilkan. Di laboratorium modern, kantong sekali pakai digunakan, di dalamnya sampel padat dan pengencer cair dimasukkan secara aseptik dan dicampur secara mekanis dengan gerakan peristaltik mesin di kantong. Mesin ini disebut stomacher.
14. Pengukur pH
Pengukur pH adalah alat untuk menentukan pH media cair, sampel cairan, dan buffer. Ini memiliki elektroda pH kaca. Jika tidak digunakan, sebaiknya disimpan setengah terendam dalam air yang terkandung dalam gelas kimia kecil dan sebaiknya ditutup dengan stoples untuk menghindari penumpukan debu di dalam air dan hilangnya air melalui penguapan.
Sebelum digunakan, meteran dikalibrasi menggunakan dua buffer standar dengan pH yang diketahui. Biasanya buffer dengan pH 4.0, 7.0 dan 9.2 tersedia secara komersial. Instrumen dinyalakan dan dibiarkan selama 30 menit untuk pemanasan. Kenop kalibrasi suhu diputar ke suhu larutan yang pH-nya diukur.
Kemudian elektroda dicelupkan ke dalam buffer (pH 7.0). Jika pembacaan bukan 7.00, kenop kalibrasi pH diputar sampai pembacaan 7.00. Kemudian, elektroda dicelupkan ke dalam buffer lain (pH 4.0 atau 9.2).
Jika pembacaannya sama dengan pH buffer yang digunakan, berarti instrumen berfungsi dengan baik. Jika tidak, elektroda diaktifkan dengan mencelupkan 0,1 N HC1 selama 24 jam. Setelah kalibrasi, pH sampel ditentukan dengan mencelupkan elektroda ke dalamnya dan mencatat pembacaannya.
Setiap kali, sebelum dicelupkan ke dalam larutan apa pun, elektroda harus dibilas dengan air suling. Sampel tidak boleh mengandung bahan lengket tersuspensi, yang dapat membentuk lapisan pada ujung elektroda dan mengurangi kepekaannya.
Pengukur pH model lama memiliki elektroda ganda (salah satunya bertindak sebagai elektroda referensi), sedangkan model baru memiliki elektroda gabungan tunggal. Selain itu, untuk mengatasi masalah koreksi suhu, kini tersedia pengukur pH dengan koreksi suhu otomatis.
Di sini, 'elektroda suhu' lain juga dimasukkan ke dalam larutan bersama dengan elektroda pH, yang mengukur suhu larutan dan secara otomatis mengoreksi pengaruh variasi suhu.
Pengukur pH yang canggih memiliki elektroda gel tunggal. Elektroda semacam itu memiliki sedikit kemungkinan kerusakan, karena hampir seluruhnya tertutup dalam selubung plastik keras kecuali di ujungnya. Ujungnya memiliki sensor pH dan suhu.
Selain itu, perawatannya mudah, karena tidak memerlukan pencelupan konstan dalam air suling, karena ujung elektroda ditutup dengan tutup plastik yang berisi larutan jenuh kalium klorida, jika tidak digunakan. Namun, dalam pembuatan media mikrobiologi, pH ditentukan oleh kertas pH dengan kisaran sempit dan disesuaikan dengan pH yang dibutuhkan dengan menambahkan asam atau basa sesuai kebutuhan.
15. Hot Plate
Hot plate digunakan untuk memanaskan bahan kimia dan reagen. Plat panas terbuat dari plat besi, yang dipanaskan oleh elemen pemanas listrik dari bawah. Tingkat pemanasan yang diperlukan diperoleh oleh regulator.
16. Mandi Air Gemetar
Terkadang, diperlukan pemanasan pada suhu yang sangat tepat. Suhu yang tepat seperti itu tidak dapat diperoleh dalam inkubator atau oven, yang suhunya berfluktuasi, meskipun sedikit. Namun, suhu yang tepat dapat dipertahankan dalam penangas air, yang memberikan suhu yang stabil.
Pemandian air terdiri dari wadah berisi air yang dipanaskan dengan elemen pemanas listrik. Suhu air yang dibutuhkan diperoleh dengan menaikkan atau menurunkan laju pemanasan dengan memutar termostat secara trial and error.
Dalam bak air goyang, zat dipanaskan pada suhu yang dibutuhkan dan pada saat yang sama, zat itu diguncang secara konstan. Pengocokan dilakukan oleh sebuah motor, yang memutar dan menggerakkan kontainer ke sana kemari di setiap putaran. Laju guncangan sekali lagi dikontrol oleh regulator. Mengguncang zat dan meningkatkan laju proses.
Kebanyakan pemandian air modern dapat diprogram dan tidak memerlukan pengaturan suhu coba-coba. Suhu air yang diinginkan dapat dipertahankan selama periode waktu yang diinginkan dengan pemrograman yang sesuai. Ini digunakan untuk budidaya bakteri dalam media kaldu pada suhu tertentu.
17. Colony Counter Quebec
Dalam penghitungan bakteri dalam sampel, diasumsikan bahwa satu bakteri menghasilkan satu koloni yang terlihat, ketika tumbuh di piring media nutrisi padat. Jadi, dengan menghitung jumlah koloni, jumlah bakteri dalam suatu sampel dapat diperkirakan.
Terkadang, koloni berukuran sangat kecil dan terlalu padat sehingga sulit untuk dihitung. Penghitungan menjadi mudah, ketika penghitung tangan mekanis, yang disebut penghitung koloni Quebec (Gambar 3.11), digunakan. Ini membagi pelat menjadi beberapa bagian persegi dan koloni diperbesar 1,5 kali oleh kaca pembesar, yang memudahkan penghitungan.
18. Penghitung Koloni Elektronik
Penghitung koloni elektronik terdiri dari dua jenis:
(1) Penghitung koloni elektronik genggam dan
(2) Penghitung koloni elektronik di atas meja.
Penghitung koloni elektronik genggam adalah penghitung koloni bergaya pena dengan spidol berujung tinta. Untuk menghitung koloni bakteri yang tumbuh dalam cawan petri, disimpan dalam posisi terbalik agar koloni terlihat melalui permukaan bawah cawan petri.
Koloni ditandai dengan menyentuh permukaan kaca cawan petri dengan ujung kempa meja koloni. Jadi, setiap koloni ditandai dengan titik yang dibuat oleh tinta ujung kain di permukaan bawah cawan petri. Dalam satu gerakan, penghitung koloni elektronik menandai, menghitung, dan mengonfirmasi dengan bunyi bip.
Jumlah kumulatif koloni ditampilkan di layar LED empat digit. Dalam kasus penghitung koloni elektronik di atas meja, cawan petri yang berisi koloni bakteri ditempatkan di atas panggung yang menyala dan bilah penghitung ditekan. Jumlah persis koloni langsung ditampilkan pada pembacaan digital.
19. Pengaduk Magnetik
Dalam pembuatan larutan, bahan kimia tertentu memerlukan pengadukan yang lama, hingga larut dalam pelarut tertentu. Pengaduk magnet digunakan untuk melarutkan zat tersebut dengan mudah dan cepat. Sebuah magnet kecil berlapis teflon, disebut 'batang pengaduk', dimasukkan ke dalam wadah yang berisi pelarut dan zat terlarut.
Kemudian, wadah ditempatkan di atas platform pengaduk magnet, di bawahnya magnet berputar dengan kecepatan tinggi oleh motor. Tertarik oleh magnet yang berputar, magnet berlapis teflon berputar di dalam wadah dan mengaduk isinya. Sekarang, zat terlarut larut dengan cepat.
Lapisan teflon mencegah magnet bereaksi dengan larutan yang bersentuhan dengannya. Setelah pelarutan sempurna, magnet berlapis teflon dikeluarkan dari larutan dengan menggunakan long retriever, yang disebut 'stirring bar retriever'.
20. Sonicator
Ini digunakan untuk memecah sel menggunakan gelombang frekuensi tinggi.
21. Vortex Mixer
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk pencampuran cairan dalam tabung reaksi. Ia memiliki rotor, yang kecepatannya dapat dikontrol. Di ujung rotor ada bagian atas karet busa. Ketika bagian bawah tabung reaksi ditekan pada bagian atas karet busa ini, rotor mulai berputar, dengan demikian memutar bagian bawah tabung reaksi dengan kecepatan tinggi.
Karena gaya sentripetal, larutan akan tercampur seluruhnya. Ini sangat membantu selama pengenceran serial dalam penghitungan bakteri, yang membutuhkan suspensi sel bakteri yang homogen.
21. Kamar Aliran Laminar
Ini adalah ruang (Gambar 3.12) yang digunakan untuk transfer aseptik dari bahan yang disterilkan, serta untuk inokulasi mikroba. Partikel debu mengambang di mikroba pelabuhan udara. Partikel debu yang mengandung mikroba ini dapat masuk ke dalam media yang disterilkan dan mencemari mereka, jika dibuka untuk waktu yang singkat selama inokulasi mikroba atau dipindahkan dari satu wadah ke wadah lain.
Untuk mengatasinya, saat inokulasi dilakukan di udara terbuka, udara dari area inokulasi kecil disterilkan dengan nyala alat pembakar bunsen. Udara yang dipanaskan menjadi ringan dan bergerak ke atas, sehingga mencegah partikel debu jatuh ke media selama proses pembukaan pendek.
Untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi oleh udara yang mengandung mikroba, ruang aliran laminar digunakan. Ini adalah ruang kuboid yang dipasang kaca. Sebuah peniup udara menghembuskan udara dari sekitarnya dan melewatkannya melalui filter HEPA (Filter Udara Partikulat Efisiensi Tinggi), sehingga membuatnya bebas debu (bebas mikroba).
Udara bebas mikroba ini melewati ruang secara laminar dan keluar dari ruang melalui pintu depan yang terbuka. Aliran laminar dari udara bebas mikroba dari bilik ke luar melalui pintu yang terbuka mencegah udara luar masuk ke dalam bilik.
Dengan demikian, ruangan tidak terkontaminasi mikroba yang ada di udara luar, meskipun pintu tetap terbuka selama inokulasi atau transfer media. Lampu UV yang dipasang di dalam ruangan mensterilkan ruangan sebelum operasi.
Ini memiliki platform stainless steel dengan penyediaan sambungan pipa gas untuk pembakar bunsen. Sebelum digunakan, platform dibersihkan dan didesinfeksi dengan lysol, pembakar bunsen disambungkan kemudian pintu kaca ditutup.
Lampu UV dinyalakan selama 10 menit untuk mensterilkan lingkungan di dalam ruangan dan kemudian dimatikan. Pintu kaca tidak boleh dibuka saat sinar UV menyala, karena sinar UV memiliki efek merugikan pada kulit dan penglihatan. Blower dinyalakan dan kemudian pintu kaca dibuka.
Sekarang, pembakar bunsen dinyalakan dan transfer media atau inokulasi dilakukan di dalam ruangan secara aseptik. Jika mikroba yang sangat berbahaya harus ditangani, ruang aliran laminar dengan sarung tangan yang menonjol ke dalam ruang dari pintu kaca depan digunakan, karena inokulasi harus dilakukan dengan menutup pintu depan.
22. Penghitung Sel Elektronik
Ini digunakan untuk menghitung secara langsung jumlah bakteri dalam sampel cairan tertentu. Contoh penghitung sel elektronik adalah 'penghitung Coulter'. Dalam peralatan ini, suspensi sel bakteri dibiarkan melewati lubang kecil di mana arus listrik mengalir.
Hambatan di lubang dicatat secara elektronik. Ketika sebuah sel melewati orifisium, sebagai non-konduktor, ia meningkatkan resistansi sesaat. Jumlah peningkatan resistensi sesaat dicatat secara elektronik, yang menunjukkan jumlah bakteri yang ada dalam sampel cairan.
23. Alat Filtrasi Membran
Zat tertentu seperti urea hancur dan kehilangan sifat aslinya, jika disterilkan dengan panas. Zat semacam itu disterilkan dengan peralatan filtrasi membran. Dalam alat ini, larutan zat yang akan disterilkan disaring melalui filter membran, yang tidak memungkinkan sel bakteri untuk turun. Filtrasi dilakukan di bawah tekanan isap untuk meningkatkan laju filtrasi (Gambar 2.19, halaman 30).
24. Mikroskop
Berbagai jenis mikroskop digunakan untuk pengamatan visual morfologi, motilitas, pewarnaan dan reaksi fluoresensi bakteri.
25. Komputer
Komputer umumnya digunakan untuk menganalisis hasil. Mereka juga digunakan untuk mengidentifikasi bakteri dengan mudah dalam beberapa jam. Jika tidak, identifikasi bakteri adalah proses yang membosankan dan membutuhkan waktu berhari-hari untuk mengidentifikasi satu spesies bakteri.
Komputer yang digunakan untuk identifikasi bakteri adalah Apple II, IBM PC, dan TRS-80 serta varian modernnya. Setiap personel peneliti di laboratorium harus dilengkapi dengan komputer, bersama dengan fasilitas internet.
26. Spektrofotometer
Ini adalah instrumen untuk mengukur perbedaan intensitas warna larutan. Seberkas cahaya dengan panjang gelombang tertentu dilewatkan melalui larutan uji dan jumlah cahaya yang diserap (atau ditransmisikan) diukur secara elektronik.
Spektrofotometer tampak sederhana dapat melewatkan cahaya dengan panjang gelombang dalam kisaran tampak, sedangkan spektrofotometer UV-cum-tampak dapat melewatkan cahaya dengan panjang gelombang ultraviolet serta dalam kisaran tampak. Di laboratorium mikrobiologi, digunakan untuk penghitungan langsung bakteri dalam suspensi maupun untuk keperluan lain.
27. Perangkat Listrik
Fluktuasi tegangan listrik di laboratorium adalah salah satu alasan terpenting, yang mengurangi umur panjang peralatan dan terkadang merusaknya. Oleh karena itu, semua peralatan yang sensitif terhadap tegangan harus dilengkapi dengan perangkat perlindungan tegangan seperti stabilisator, penstabil servo atau transformator tegangan konstan (CVT) sesuai dengan rekomendasi dari produsen peralatan tersebut.
Komputer, timbangan, dan beberapa peralatan canggih harus dihubungkan melalui catu daya tak terputus (UPS), karena gangguan apa pun dalam catu daya listrik selama pengoperasiannya dapat merusak parah beberapa komponen sensitifnya.
Laboratorium harus memiliki generator berkapasitas tinggi untuk memasok arus listrik ke seluruh laboratorium jika terjadi kegagalan daya. Hal ini karena, pemadaman listrik tidak hanya membuat aktivitas laboratorium terhenti, tetapi juga menyebabkan perubahan permanen yang tidak diinginkan pada sampel yang disimpan di lemari es dan lemari es.
28. Sistem Identifikasi Bakteri Otomatis
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk identifikasi bakteri otomatis dengan bantuan komputer (Gambar 3.13 dan 3.14). Metode konvensional untuk mengidentifikasi bakteri sangat panjang dan tidak praktis.
Ini terutama melibatkan pewarnaan, tes motilitas, karakteristik budaya, serangkaian tes biokimia dan akhirnya mencari nama bakteri di 'Manual Penentu Bakteriologi Bergey' dengan mencocokkan hasil dengan yang tersedia di manual. Sistem identifikasi bakteri otomatis secara otomatis mengidentifikasi bakteri dalam waktu yang sangat singkat.
Sistem, seperti VITEK 2 (Gambar 3.14) menggunakan kartu sekali pakai. Satu kartu diperlukan untuk identifikasi satu bakteri. Sistem ini dapat menampung serangkaian kartu, yang dapat disusun pada kaset, sehingga memungkinkan identifikasi beberapa bakteri sekaligus.
Setiap kartu memiliki beberapa baris sumur. Biasanya ada 8 baris masing-masing 8 sumur (8X8 = 64 sumur). Sumur mengandung media dehidrasi berbeda yang diperlukan untuk uji biokimia yang berbeda. Sebuah tabung kapiler dipasang pada setiap kartu, yang menyedot suspensi bakteri untuk diidentifikasi dan disalurkan ke semua sumur.
Media dehidrasi di dalam sumur menjadi terhidrasi oleh cairan suspensi, sehingga memungkinkan pertumbuhan bakteri. Setelah periode inkubasi yang ditentukan, perubahan warna di semua sumur dicatat secara otomatis dalam sistem.
Hasil dari perubahan warna tersebut masuk ke komputer yang terpasang ke sistem. Komputer secara otomatis membandingkan hasil dengan yang tersedia di perpustakaannya untuk bakteri yang berbeda dan akhirnya memberikan nama bakteri dengan probabilitas yang pasti.
Untuk identifikasi, bakteri tertentu, yang tumbuh sebagai koloni terisolasi di atas piring atau sebagai kultur murni yang ditanam di atas miring diambil. Sejumlah bakteri dipindahkan secara aseptik ke dalam larutan garam steril dalam tabung reaksi dan suspensi bakteri dibuat.
Suspensi harus mengandung kepadatan bakteri yang ditentukan, seperti yang ditentukan oleh densitometer. Tabung reaksi dipasang ke kaset dan sebuah kartu dipasang di dekatnya, sedemikian rupa sehingga ujung tabung kapiler hisap kartu tetap terendam dalam dalam suspensi.
Beberapa tabung reaksi dan kartu seperti itu dipasang pada setiap kaset, tergantung pada jumlah bakteri yang akan diidentifikasi. Kaset dimasukkan ke dalam ruang vakum sistem. Vakum tinggi dibuat di dalam ruangan, yang memaksa suspensi bakteri tersedot ke dalam tabung kapiler dan disalurkan ke dalam lubang kartu.
Kaset dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam ruang inkubasi dan analisis. Di sini, tabung kapiler dipotong dan ujung potongan ditutup secara otomatis. Kemudian, proses inkubasi dimulai pada suhu yang ditentukan untuk jangka waktu tertentu, yang diprogram oleh panel kendali. Selama inkubasi, dalam setiap 15 menit, setiap kartu secara otomatis masuk ke pembaca warna, yang membaca perubahan warna di dalam lubang dan mencatatnya.
Hasil rekaman masuk ke komputer, yang secara otomatis membandingkannya dengan yang tersedia di perpustakaannya untuk berbagai bakteri. Akhirnya, ini memberi nama bakteri dengan probabilitas yang pasti. Kartu bekas jatuh ke dalam ruang pembuangan limbah sistem untuk dibuang dan dibuang akhir setelah sterilisasi.
Sistem identifikasi bakteri otomatis yang terkenal adalah VITEK 2 dan API. Sementara VITEK 2 bekerja berdasarkan prinsip di atas, sistem API (Analytical Profile Indexing) (Gambar 3.13) menggunakan metode yang sedikit berbeda untuk identifikasi otomatis bakteri, yang melibatkan inokulasi manual dan inkubasi eksternal.
29. Instrumen Isolasi
- PCR Thermocycler
- Refrigerated Centrifuge
- Ultra-centrifuge
- Gas Chromatography (GC)
- Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC)
- Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
- Kromatografi Kertas
- Kromatografi Kolom dan Unit Elektroforesis
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk isolasi, pemurnian dan identifikasi zat biokimia, seperti DNA bakteri, plasmid, racun mikroba, dll. Polymerase chain reaction (PCR) adalah alat penting dalam metode berbasis asam nukleat. Ini adalah pekerja keras di laboratorium mikrobiologi dan bioteknologi modern.
Tidak ada komentar:
Posting Komentar