Bahan Kimia dan Media yang digunakan di Lab Mikrobiologi
Di laboratorium, bakteri ditanam pada zat kaya nutrisi yang disebut 'media'. Berbagai media juga diperlukan untuk penggunaan tertentu.
Komponen media ditimbang dalam proporsi tertentu, dicampur dengan jumlah air yang diperlukan dan disterilkan dalam autoklaf. Bakteri diinokulasi ke dalamnya dan dibiarkan tumbuh.
Menimbang bahan-bahan media adalah pekerjaan yang membosankan dan beberapa bahan mungkin terlewat tanpa disadari. Untuk mengatasi kesulitan ini, kini tersedia media siap pakai dalam bentuk bubuk.
Media ini berisi semua bahan dengan proporsi yang ditentukan. Untuk jumlah tertentu dari media bubuk (seperti yang disebutkan pada label kemasan), sejumlah air ditambahkan dan disterilkan.
Bahan Kimia dan Media Kultur yang digunakan di Lab Mikrobiologi :
1. Media yang Ditentukan Secara Kimiawi
Media yang didefinisikan secara kimiawi atau media sintetik adalah media di mana semua bahan kimia tertentu (molekul dan atom) dan konsentrasinya dapat ditentukan. Bahan kimia tersebut mungkin termasuk H 2 0, NaCl, Na 2 S0 4 , KCI dan agar. Contoh: kaldu sintetis anorganik, kaldu garam glukosa.
2. Media Kompleks
Media kompleks adalah media di mana semua bahan kimia tertentu (molekul dan atom) dan konsentrasinya tidak dapat ditentukan. Untuk bakteri yang rewel, beberapa zat kompleks, seperti ekstrak daging sapi, ekstrak ragi, dan pepton digunakan dalam media, yang komposisi kimia persisnya (molekul dan atom) sangat bervariasi dan tidak diketahui. Media ini terutama digunakan untuk pertumbuhan bakteri yang banyak. Contoh: kaldu nutrisi dan agar nutrisi.
3. Media Khusus
Media ini digunakan untuk tujuan tertentu, bukan hanya untuk pertumbuhan bakteri.
Berdasarkan tujuan penggunaan, mereka dari jenis berikut :
1. Media Selektif
Merupakan media yang mengandung komposisi bahan tertentu, yang mendukung pertumbuhan beberapa bakteri target dan menghambat pertumbuhan yang lain. Mereka digunakan untuk mengisolasi kelompok bakteri tertentu.
Ketika sekelompok bakteri tertentu tumbuh dalam media selektif, ia memanifestasikan karakteristik koloni yang khas, yang membantu dalam deteksi dan pencacahan dalam berbagai sampel. Bakteri tertentu yang diinginkan, ditemukan sebagai koloni yang terisolasi, diambil untuk pengujian lebih lanjut untuk identifikasi yang dikonfirmasi. Terkadang, media selektif juga digunakan sebagai media diferensial.
Contoh media selektif diberikan di bawah ini :
(a) MacConkey Agar
Ini digunakan untuk menumbuhkan spesies bakteri gram negatif. Kristal violet yang digunakan dalam media menghambat pertumbuhan bakteri gram positif, sementara memungkinkan spesies gram negatif tumbuh.
(b) EMB Agar
Agar-agar biru metilen eosin (agar EMB) digunakan untuk menumbuhkan spesies bakteri gram negatif. Ini sebagian menghambat pertumbuhan bakteri gram positif, yang menyebabkan spesies bakteri gram negatif tumbuh lebih deras di dalamnya. Ini juga digunakan dalam identifikasi bentuk coli enterik Escherichia coli, yang tumbuh di atasnya sebagai koloni biru-hitam dengan kemilau hijau metalik.
Coliform enterik lainnya, seperti Enterobacter aerogenes, tumbuh di atasnya sebagai koloni tebal, berlendir, berwarna merah muda. Selain pemicu laktosa ini, non-pemicu laktosa juga tumbuh di atasnya, tetapi sebagai koloni tak berwarna, yang mengambil warna ungu mediumnya.
(c) Garam Mannitol Agar
Ini digunakan untuk menumbuhkan Staphylococcus spp. Konsentrasi garam yang tinggi (7,5% NaCl) yang ada di media menghambat pertumbuhan sebagian besar bakteri lain. Ini juga membedakan Staphylococcus menjadi Staphylococcus yang memfermentasi manitol, yang tumbuh dengan zona kuning di sekitar koloni dan Staphylococcus non-fermentasi manitol, yang tumbuh tanpa perubahan warna.
2. Media Diferensial
media diferensial adalah media tempat tumbuhnya bakteri yang berbeda sebagai koloni, dengan karakteristik visual yang berbeda.
Contoh media diferensial diberikan di bawah ini:
(a) Agar MacConkey
Pada media ini, bakteri usus normal non-patogen yaitu fermentasi laktosa tumbuh sebagai koloni merah, sedangkan bakteri usus patogen non-fermentasi laktosa tumbuh sebagai koloni tidak berwarna.
(b) Blood Agar
Darah adalah konstituen penting dari media ini. Ini adalah bahan pengayaan untuk bakteri rewel seperti Streptococcus spp.
Ini digunakan untuk membedakan sifat-sifat streptokokus untuk menghasilkan berbagai jenis hemolisis darah sebagai berikut :
(i) hemolisis α:
Di sini, terjadi kerusakan sebagian sel darah merah, menghasilkan zona warna hijau di sekitar koloni akibat pengurangan hemoglobin menjadi methaemoglobin.
(ii) em-hemolisis:
Di sini, hemolisis sel darah merah lengkap terjadi, menghasilkan zona bening di sekitar koloni. Hemolisis ini melahirkan dua jenis hemolisin, yaitu 'streptolysin O', yang merupakan enzim antigenik labil oksigen dan 'streptolysin S', yang merupakan lisin stabil oksigen non-antigenik.
(iii) hemolisis y:
Di sini, tidak terjadi hemolisis, sehingga tidak ada zona di sekitar koloni.
3. Media Transportasi
Mereka adalah media yang digunakan untuk pengangkutan singkat bakteri, selama pertumbuhan tidak diinginkan. Media tersebut hanya berisi buffer dan garam. Media tidak mengandung sumber C, N dan faktor pertumbuhan lainnya. Ini mencegah pertumbuhan mikroba.
4. Media Pengayaan
Mereka adalah media di mana proporsi relatif dari bakteri target diperkaya, karena mengandung nutrisi untuk bakteri target, sedangkan yang lain tidak. Misalnya, feses mengandung jumlah Salmonella dan Shigella yang sangat rendah.
Untuk mengisolasi mereka terlebih dahulu dibudidayakan dalam kaldu selenite atau kaldu GN (gram negatif), di mana hanya Salmonella dan Shigella yang akan tumbuh deras, sedangkan yang lain tidak akan tumbuh dan akan tetap dalam fase lag. Kemudian dioleskan pada media padat untuk mendapatkan koloni Salmonella dan Shigella.
5. Media yang Diperkaya
Mereka adalah media yang digunakan untuk mendukung pertumbuhan jenis bakteri secara maksimal.
6. Media Biokimia
Media ini digunakan untuk menguji aktivitas biokimia bakteri, yang membantu dalam identifikasi mereka. Daftar media biokimia penting yang digunakan dalam uji biokimia yang dilakukan untuk identifikasi bakteri yang berbeda diberikan di bawah ini.
Nomer | Tes Biokimia | Media Biokimia |
1. | Tes Indole | Kaldu indole |
2. | Uji metil merah | Kaldu MR-VP |
3. | Tes Voges-Proskauer | Kaldu MR-VP |
4. | Tes penggunaan sitrat | Simmons citrate agar |
5. | Uji oksidasi-fermentasi (Uji O / F) | Kaldu glukosa Hugh-Leifson |
6. | Uji dekarboksilase asam amino | Kaldu dekarboksilase asam amino |
7. | Tes Urease | Urea agar |
8. | Uji reduksi nitrat | Kaldu nitrat |
9. | Tes besi gula rangkap tiga (TSI) | Agar-agar besi tiga gula (agar-agar TSI) |
10. | Tes gelatinase | Agar gelatin Fraizer |
11. | Uji hidrolisis pati | Starch agar |
12. | Uji hidrolisis lipid | Agar Tributirin |
13. | Tes Deoxyribonuclease (DNase) | DNase agar |
14. | Tes deaminase fenilalanin | Agar fenilalanin |
15. | Tes orto-nitrofenil galaktosida (tes ONPG) | Agar-agar besi tiga gula (agar-agar TSI) |
16. | Uji hidrogen sulfida | Triples sugar iron agar (TSI agar) / kaldu sistein |
17. | Uji fermentasi karbohidrat | Kaldu karbohidrat |
18. | Tes susu lakmus | Kaldu susu lakmus |
Tidak ada komentar:
Posting Komentar